Диагностика менингококковой инфекции

Прежде всего для подтверждения диагноза при менингококковой инфекции проводится клиническое исследование крови с подсчетом количества лейкоцитов и лейкоцитарной формулы, определения СОЭ и количества тромбоцитов. Как правило, при менингококковом менингите отмечается лейкоцитоз с нейтрофильным смещением влево, повышение СОЭ. В обязательном порядке проводят коагулологические тесты: определяют протромбиновый индекс, время свертывания, концентрацию фибриногена и продуктов деградации фибрина.
При исследовании СМЖ в первые часы заболевания она может оставаться прозрачной с небольшим смешанным цитозом. Но чаще, уже в первые сутки она становится мутной, в клеточном составе 80-90% приходится на нейтрофилы, в мазках видны диплококки, находящиеся внутри нейтрофилов.
При менингокковой инфекции материалом для бактериологического исследования может выступать спинномозговая жидкость, носоглоточная слизь, кровь, экссудат из петехий, трупный материал (кровь, ликвор, кусочки мозга, пораженные участки кожи).
Микробиологическое исследование ликвора состоит из бактериоскопии мазка, выделения возбудителя и его идентификации, серологической детекции антигенов в СМЖ. Ликвор исследуют немедленно после доставки в лабораторию. Если жидкость мутная, исследование осуществляют без предварительной подготовки. Прозрачную жидкость центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин, осадок высевают и микроскопируют.
Из материала готовят мазок, высушивают на воздухе, фиксируют смесью Никифорова в течение 5 мин и красят метиленовым синим или по Граму. N. meningitidis могут располагаться вне клетки или внутри лейкоцитов, по Граму окрашиваются отрицательно, выглядят как диплококки, похожи на зерна кофе. Выявление в мазках типичных менингококков или других микроорганизмов является основанием для выдачи предварительного ответа, о чем немедленно информируют врача лечебно-профилактического учреждения [15].
Выделение возбудителя. Стерильной пастеровской пипеткой с дна пробирки берут 0,3-0,5 см3 материала и по 2-3 капли засевают: на сывороточный, 5% кровяной, "шоколадный" (или среду Левинталя) агары и на среду для контроля стерильности. При необходимости, в зависимости от результатов микроскопии осадка, можно дополнительно сделать высев на среды ЖСА и Эндо. Такое разнообразие сред, которое используется для первичного посева СМЖ позволяет ускорить выделение микроорганизмов, которые могут быть факторами бактериальных менингитов. Посевы помещают в термостат при температуре 370С и создают условия с повышенной концентрацией СО2 (5-10%). При наличии достаточного количества СМЖ рекомендуется 2-3 капли засеять на чашку со средой Мюллер-Хинтона и определить чувствительность микроорганизма к антибиотикам [23].
Остальная СМЖ используется для проведения серологических исследований (коагглютинация, латекс-агглютинация, ИФА), ПЦР и для посева в среду обогащения (4 см3 0,1% полужидкого агара с 1 см3 сыворотки). Посевы СМЖ выдерживают в термостате до 7 суток при температуре 370С с периодическими высевами на твердые питательные среды [22].
Менингококк на сывороточном агаре образует плоские, круглые с ровным краем, нежные колонии с опалесценцией размером 2-3 мм. На "шоколадном" и кровяном агарах его колонии нежные, сероватого цвета, с блестящей поверхностью и ровными краями, имеют маслянистую консистенцию, размерами до 3,0 мм. Менингококки не изменяют цвета среды [15].
Колонии, подозрительные на менингококк, отсеивают на сывороточный агар для получения и накопления чистой культуры, которую в дальнейшем идентифицируют по характерным свойствам и изучают ее чувствительность к антибиотикам

. Для дифференциации N. meningitidis и B. (M) catarrhalis культуру отсевают в две пробирки с сывороточным агаром (СА) и одну – с питательным агаром (МПА). Посевы на СА выращивают параллельно при температуре 370С и 220С, на МПА – при 370С. Одновременное культивирование выделенного возбудителя на МПА и СА является простым и надежным тестом, что позволяет дифференцировать N. meningitidis, не способную расти на СА при 220С, и на МПА при 370С, С, от похожей на
нее B. (M) catarrhalis [15].
Далее изучают биохимические свойства нейссерий: отсутствие роста на агаре с 0,2% содержанием желчи или задержка роста вокруг дисков с желчью; активность в отношении к углеводам (глюкозы, мальтозы, сахарозы, фруктозы, лактозы); редукция нитратов; способность образовывать полисахарид на среде с 5% содержанием сахарозы.
Чистая культура, которая на основании морфологических и биохимических признаков, предварительно отнесена к N. meningitidis, подвергается серотипированию в реакции аггаглютинации с менингококковыми сыворотками [23].
При исследовании крови засеянные флаконы с кровью помещают в термостат при температуре 370С на 24 ч. При наличии роста в питательных средах первичного посева – микроскопируют. В зависимости от результатов бактериоскопии кровь высевают из флаконов на СА, КА или ША. Чашки
инкубируют при температуре 370С в эксикаторах со свечей. Учет результатов посева на СА, КА или ША проводят так же, как и в случае исследования СМЖ [22].
Если в качестве материала выступает носоглоточная слизь, то смоченные тампоны или тампоны в транспортной среде (предварительно оттиснув о стенки пробирки) засевают на чашку с СА, ША и КА. Засеяные чашки переносят на 24 ч в термостат при температуре 370С, создав для них условия повышенного содержания СО2. На второй день пересматривают чашки, засеяные накануне, визуально и под стереоскопическим микроскопом. При наличии роста микроскопируют подозрительные колонии, отсевают для получения чистой культуры и в дальнейшем идентифицируют ее.
При отсутствии роста на чашках проводят повторный пересмотр их через 40-48 ч от посева, и делают высев с полужидкой среды в среду обогащения. Дальнейшую идентификацию проводят как и при исследовании СМЖ. Изучают чувствительность выделенных микроорганизмов к антибиотикам [15].
Отобранный материал из петехий засевают на чашки Петри с СА, который содержит антибиотики (ристомицин или линкомицин) для подавления роста микрофлоры кожи. Из остатка экссудата готовят мазки для микроскопии. Кроме того, мазки из содержимого петехий можно приготовить в виде отпечатков. Для этого стерильной петлей осторожно скарифицируют поверхность петехий, потом прикладывают к нескольким местам стерильное предметное стекло; отпечатки фиксируют пламенем горелки, красят. На основании данных микроскопии возможная выдача предварительного ответа. Засеяные чашки инкубируют при температуре 370С. Через 24 ч (при отсутствии роста – через 48 ч), подозрительные на менингококк колонии отсеивают и изучают по описанной схеме. Изучают чувствительность выделенных микроорганизмов к антибиотикам [23].
Для выявления антигенов (Аг) возбудителя в качестве экспресс-диагностики могут использоваться реакция агглютинации латекса, встречный иммуноэлектрофорез, непрямой метод флуоресцирующих антител, реакция непрямой гемагглютинации с антительными эритроцитарными диагностикумами, реакция коаглютинации [22]