Методы лабораторной диагностики выделений женской половой сферы

Лабораторная диагностика возбудителей воспалительных заболеваний половых органов представлена бактериоскопическими, культуральными, серологическими и молекулярно-биологическими методами.
Бактериоскопическое (микроскопическое) исследование основано на микроскопии окрашенных или нативных мазков, взятых из заднего свода влагалища, цервикального канала и уретры. Исследование отделяемого женских половых органов в гинекологической практике производят с целью определения функционального состояния яичников, выявления клеток злокачественных опухолей, обнаружение простейших и флоры (гонококки, трихомонады) [8].
Исследование с целью определения функционального состояния яичников.
Взятие материала производят из заднебокового свода влагалища. Материалом из заднего свода влагалища пользоваться не следует, так как в нем скапливаются ранее отторгнутые эпителиальные клетки. Содержимое берут гинекологической ложечкой. Материал, взятый ватным тампоном, для исследования не годится.
Содержимое равномерно распределяют на предметном стекле. Мазки высушивают на воздухе и окрашивают:
Метиленовым синим (ориентировочный метод)
Реактив- 1% водный раствор метиленового синего.
Ход окраски: на высушенный препарат наливают метиленовый синий на 1-2 мин, затем смывают водой и высушивают.
Фуксином.
Реактив: 3г кислого фуксина растворяют в 100 мл 95% спирта. К 12 мл этого раствора прибавляют 100 мл дистиллированной воды.
Ход окраски: на высушенный препарат наливают фуксин на 1 мин, затем смывают водой и высушивают
Гематоксилин - эозином;
Реактивы: - 95% этиловый спирт; - водный раствор гематоксилина; - 1% водный раствор эозина.
Ход окраски: высушенные мазки фиксируют в 95% этиловом спирте (10-15 мин). Окрашивают водным раствором гематоксилина в течение 7-10 мин до слабо-фиолетового цвета. Промывают водой. Окрашивают 1% водным раствором эозина в течение 30 сек. Промывают водой и высушивают.
по Романовскому – Гимзе.
Реактивы: - фиксатор Май- Грюнвальда ; - краситель Романовского – Гимзе.
Ход окраски: высушенные мазки фиксируют фиксатором Май- Грюнвальда в течение 2-3 мин, промывают водой, затем заливают рабочим раствором краски Романовского - Гимзе на -20 - 25 мин. Затем промывают проточной водой и высушивают.
по Папаниколау.
Реактивы: - смесь Никифорова; - спирты 95,90,80,70%; - гематоксилин Гарриса; - 0,25% раствор соляной кислоты; - краска оранжевая G; - краска (ЕА-36); - абсолютный спирт; - ксилол; - канадский бальзам.
Ход окраски: Мазки фиксируют в смеси Никифорова 25 мин., после чего проводят их через серию спиртов, понижающей концентрации: 95, 80, 70% и дистиллированную воду (в каждом растворе мазки следует прополоскать). Далее мазки окрашивают гематоксилином Гарриса или Боммера в течение 50 мин. Промывают в 2 сосудах с дистиллированной водой 1 - 2 секунды и дифференцируют в 0,25% раствор соляной кислоты (1 мин). После дифференцирования мазки проводят через спирт, повышающей концентрации: 70% (дважды), 80%, 95%. Окрашивают красителем оранжевый G (1 мин) и проводят через 2 сосуда с 70% спиртом. Затем мазки окрашивают составной краской (ЕА-36) 1,5 минуты и проводят через 95% спирт в 3 сосудах, затем через смесь равных частей абсолютного спирта и ксилола. Через ксилол (1 мин) и помещают в канадский бальзам.
Из приведенных выше окрасок самые простые – окраска фуксином и метиленовым синим, но эти окраски не дают полного представления обо всей цитологической картине

. Метод Папаниколау сложен, требует много дефицитных и дорогостоящих реактивов, поэтому реже используется в практической работе лабораторий. Окраска по Романовскому вполне пригодна для цитологического исследования влагалищных мазков и выгодно отличается тем, что может применяться в любой лаборатории [9].
Исследование на клетки новообразований.
Материал, взятый из влагалища путем отсоса пипеткой с пораженного участка (эрозии, язвы), тампоном или путем отпечатка, может служить для обнаружения клеток злокачественных опухолей. Из полученного отделяемого приготовляют тонкие препараты и красят по Романовскому или другими методами, принятыми в цитологии. Также предварительно просматривают нативные препараты.
Исследование влагалищного содержимого на степень чистоты.
Мазки для исследования на влагалищную палочку (палочку Дедерлейна) готовят так же, как для цитологического исследования и окрашивают по Граму:
Реактивы: - карболовый раствор генцианвиолета; - раствор Люголя; - 95% этиловый спирт; - 40% раствор карболового фуксина.
Ход окраски: на фиксированный препарат кладут полоску фильтровальной бумаги и наливают раствор генцианвиолета. Красят 1,5 - 2 минуты. Бумажку сбрасывают и заливают препарат раствором Люголя на 2 мин. Раствор Люголя сливают и прополаскивают препарат в спирте до сероватого цвета. Промывают водой и окрашивают водным раствором карболового фуксина. Промывают водой и высушивают препарат на воздухе.
Микроскопическое исследование на микрофлору.
Выделения женских половых органов исследуют в основном для обнаружения гонококков, трихомонад, хламидий и др. Мазок берется шпателем или лопаточкой, которые, не повреждая слизистую оболочку, собирают скопившиеся в их просвете выделения. Перед взятием мазков гинеколог вводит во влагалище специальный инструмент - гинекологическое зеркало, позволяющий видеть стенки влагалища и шейку матки.
У женщин отделяемое берут одновременно из уретры, влагалища и шейки матки. Из полученного материала готовят тонкие мазки. На стекле и бланке соответственно делают пометку U, V, C. Высушенные препараты окрашивают по Граму, метиленовым синим и др. методами [10].
Культуральное исследование.
Метод посева и выделения чистых культур возбудителей заболевания служит «золотым стандартом» микробиологической диагностики. Культуральное исследование наряду с микроскопией — основной метод при диагностике гонореи, трихомониаза, хламидиоза.
Материал, взятый из шейки матки, уретры, может подвергаться культивированию на наличие N. gonorrhoeae. Приступать к исследованию необходимо сразу же после поступления материала в лабораторию, предпочтительно начинать исследование непосредственно в клинике. Культивирование материала на наличие гонококковой инфекции для женщин является очень важным диагностическим инструментом. Чувствительность метода культивирования материала из шейки матки для выявления гонореи составляет 80–90% [11]. Чувствительность метода снижается, если материал для исследования взят во время менструации.
Для выделения N. gonorrhoeae используют шоколадный агар с ростовыми и селективными добавками (модифицированный агар Тайера-Мартина), который инкубируют, в атмосфере «свечного газа» и при высокой влажности