Материалы и методы исследования

Практический этап исследования проводился в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Центр государственного санитарно-эпидемиологического надзора» Управления делами Президента Российской Федерации.
Куда поставлялась кровь для проведения анализа по выявлению маркеров к вирусу гепатита С из разных медицинских учреждений города Москвы. Все поступающие в лабораторию материалы зашифрованы, что исключает возможность разглашения медицинской тайны пациента. В работе проанализированы данные результатов исследования 6257 пациентов за 2017 календарный год. Из них на долю лиц мужского пола пришлось 3064 что составило 48.96 %, на долю лиц женского пола 3193– 51.04 %.
Математическая оценка полученных результатов проведена в лаборатории «Морфологии, физиологии экологии клетки» кафедры физиологии, экологии человека и медико-биологических знаний Биолого-химического факультета МГОУ в 2018-2019 учебном году.
Кроме того проанализированы данные официальной медицинской статистики по заболеваемости разных возрастных групп населения города Москвы вирусным гепатитом С за период с 2010 по 2017 годы.
Анализ крови на выявление антител к вирусу гепатита С проводился по стандартной методике серологического исследования сыворотки крови человека.
Для выявления иммуноглобулинов класса IgM, IgG Все в третьем лице использовался иммуноферментный метод. Были использованы наборы реагентов для определения иммуноглобулинов фирмы «Вектор Бест Европа». Эти наборы используются во многих мед учреждениях в нашей стране. Принцип метода основан на специфической реакции по типу антиген антитело. Набор реагентов предназначен для выявления иммуноглобулинов классов G и M в сыворотке (плазме) крови человека. Рекомендуется для обследования доноров крови, органов, тканей человека и дифференциальной диагностики вирусных гепатитов.
Состав набора:
- планшет с иммобилизованными рекомбинантными антигенами.;
- положительный контрольный образец, инактивированный, (К +, прозрачная жидкость красного цвета) 1 фл., 1 мл;
- отрицательный контрольный образец, инактивированный (К, прозрачная жидкость жёлтого цвета) 1 фл., 1 мл;
- конъюгат (антитела к IgM и IgG человека, меченные пероксидазой хрена) 1 фл. или 2 фл.;
- раствор для разведения сывороток (РС, жидкость красного цвета) 2 фл., 10 мл;
- раствор для предварительного разведения (РПР) 1 фл., 3 мл;
- раствор для разведения конъюгата (РК, жидкость зелёного цвета) 2 фл. по 13 мл;
- концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином (ФСБ-Т 25) 2 фл. по 28 мл;
- субстратный буферный раствор (СБР) 2 фл

. по 13 мл;
- тетраметилбензидин (ТМБ), концентрат 1 фл., 1,5 мл;
- стоп-реагент 1 фл., 21 мл;
- плёнка для заклеивания планшета 4 шт.;
- ванночка для реагентов 2 шт.;
- наконечники для пипеток 16 шт.
Способ применения: при работе с исследуемыми сыворотками и контрольными образцами следует соблюдать меры предосторожности, принятые при работе с потенциально инфекционным материалом:
* работать в резиновых перчатках;
* не пипетировать растворы ртом;
* все использованные материалы дезинфицировать в соответствии с требованиями СП и МУ.
Для приготовления растворов и проведения ИФА следует использовать чистую мерную посуду и автоматические пипетки с погрешностью измерения объёмов не более 5%. Желательно использовать свежеотобранные образцы сыворотки (плазмы) крови. Допускается использование образцов, хранившихся при (2 8) С не более 5 суток, либо при минус (20±3) С, если необходимо более длительное хранение. Сыворотки, содержащие взвешенные частицы, могут дать неправильный результат. Такие образцы перед использованием следует центрифугировать мин при 3000 об/мин. Нельзя использовать проросшие, гемолизи- рованные, гиперлипидные сыворотки или подвергавшиеся многократному замораживанию и оттаиванию. Перед постановкой реакции все компоненты тест-системы необходимо выдержать не менее 30 мин при комнатной температуре (18-25) С.
Лиофилизированные компоненты должны быть восстановлены, как минимум, за 15 минут до их использования. Сразу после постановки реакции неиспользованный планшет и плотно закрытые флаконы с исходными компонентами необходимо поместить в холодильник (2-8) С. Растворы ТМБ и конъюгата готовить непосредственно перед использованием. Необходимо исключить воздействие прямого света на раствор ТМБ. При промывке лунки (стрипа, планшета) заполнять полностью (400 мкл промывочного раствора), не допуская переливания промывочного раствора через края лунок, и не касаясь лунок наконечником пипетки. Время между заполнением и опорожнением лунок должно быть не менее 30 сек. При использовании автоматического или ручного промывателя необходимо следить за состоянием ёмкости для промывочного раствора и соединительных шлангов: в них не должно
Проведение иммуноферментного анализа.
Приготовить промывочный раствор и концентрированный раствор конъюгата. Перед использованием лунки планшета промыть 1 раз промывочным раствором. Каждую лунку при промывке необходимо заполнять полностью (400 мкл промывочного раствора). Необходимо добиваться полного опорожнения лунок после каждого их заполнения