Лабораторная диагностика

Прижизненную диагностику анаплазмоза проводят в том случае, если имеются больные или подозреваемые в заболевании животные. Для этого отбирают пробы цельной крови, готовят тонкие мазки крови или исследуют сыворотку [8, 9, 13].
Кровь для исследования у животных отбирают до начала лечения [8, 9, 13].
Лабораторная диагностика анаплазмоза включает [8, 9, 13] :
- микроскопический метод,
- серологические методы,
- полимеразную цепную реакцию,
- метод биопробы.
1. Микроскопический метод исследования позволяет обнаружить возбудителя анаплазмоза в мазках крови, которые окрашивают по Романовскому – Гимзе или методом Щуренковой-Межанской [8, 9, 13].
Техника приготовления мазка. Для приготовления мазка берут чистое предметное стекло, на него наносят каплю крови и специальным отшлифованным стеклом делают мазок, после чего сразу же переворачивают стекло мазком вниз на 10-15 секунд, чтобы избежать загрязнения пылевыми частицами [8, 9, 13].
Затем мазок сушат на воздухе, фиксируют метиловым спиртом – экспозиция 3-5 минут или этиловым – экспозиция 20-25 минут, после чего сушат при комнатной температуре [8, 9, 13].
Методика проведения окраски мазков по Романовскому – Гимзе: зафиксированный мазок погружают в предварительно подготовленный раствор краски (азурэозин разводят с дистиллированной водой в соотношении 1:1) на 25-45 минут, после краску смывают дистиллированной водой, мазки сушат вертикально [8, 9, 13].
Методика проведения окраски мазков по Шуренковой – Межанской: первоначально готовят раствор 1. Смешивают: 1 г метиленового синего с 75 мл кипяченной воды и 1,5 г марганцовокислого калия с 75 мл кипяченной воды

. Полученные растворы сливают в колбу и ставят ее на водяную баню при 100°С на 40 минут. После водяной бани раствор остужают и фильтруют [8, 9, 13].
Для приготовления 2 раствора берут половину 1 раствора и добавляют в него 200 мл дистиллированной воды с 15 каплями разведенной соляной кислоты, в результате получают раствор А. Затем берут 200 мл кипяченной воды и добавляют в него 0,2 г эозина – это раствор Б [8, 9, 13].
Для окрашивания фиксированный мазок помещают в раствор Б на 12-20 секунд, промывают водой и помещают в раствор А, затем опять промывают водой, просушивают на фильтровальной бумаге и микроскопируют [8, 9, 13].
Методика микроскопирования: приготовленные мазки микроскопируют в световом микроскопе (100×10) под иммерсией. Анаплазмы находят в виде внутри эритроцитов, в виде округлых включений темно-красного или темно-фиолетового цвета, по периферии или ближе к центру [8, 9, 13].
Следует дифференцировать анаплазмы от базофильной зернистости эритроцитов (гранулы сине-фиолетового или синего цвета, разнообразной формы) и телец Хауэлла-Жолли (мелкие круглые фиолетово-красные включения, размером 1-2 мкм). Анаплазмы меньше и менее интенсивно окрашены, чем тельца Хауэлла-Жолли, а базофильная зернистость характеризуется многочисленными включениями, в отличии от анаплазм которых находят в количестве 1-2 на один эритроцит [8, 9, 13].
2. Серологическую диагностику проводят посредством исследования сыворотки крови на наличие анаплазменных антител