Гражданка А. 18 лет с суицидной целью приняла 20 таблеток амитриптилина. Проведите химико-токсикологическое исследование внутренних органов трупа гражданки А. и дайте заключение.
Рисунок SEQ Рисунок \* ARABIC 7. Структура амитриптилина
Амитриптилин
N,N-диметил-3-(2-трицикло[9.4.0.03,8]пентадека-1(15),3,5,7,11,13-гексаенилиден)пропан-1-амин
Белые кристаллы
Температура плавления 197оС
рКа = 9,4-9,7
Решение
Практически нерастворим в воде (102,986л/г)
Гидрохлорид легко растворим в воде, спирте, хлороформе, практически нерастворим в эфире.
Метаболизм происходит в печени – основной метаболит нортриптилин
Рисунок SEQ Рисунок \* ARABIC 8. Метаболизм амитриптилина.
Описан метод изолирования амитриптилина и нортриптилина из биологических жидкостей, печени.
Пробоподготовка: к 3 мл крови или мочи добавляется внутренний стандарт – налтрексон (0,15 мг/мл – 200 мкл) + 3 мл насыщенного р-ра тетрабората натрия. Жидкость-жидкостная экстракция проводится 3 мл смеси гептан-этилацетат-изопропанол (5:5:1), извлечение упаривается, сух остаток растворить в 200 мкл 0,5% раствора трифторуксусной кислоты в 10% растворе ацетонитрила (дериватизация). Затем добавляется 100 мкл гептана и раствор центрифугируется. Водную фазу исследуют на жидкостном хроматографе.
Для печени: 2г измельчённой ткани печени + раствор налтрексона, оставить на 15 мин. Далее добавляется 4 мл смеси ацетонитрил – 18% соляная кислота (9:1), настаивается 1 ч, центрифугируетсяи, извлечение декантируется в другой флакон, содержащий 4 мл 2,5% раствора Na2SO4. Возможно изолирование нейтральным ацетоном (метод Карташова) [10]. К извлечению + 3 мл гептана, встряхнуть, центрифугировать
. Гептановый слой отделяется, водная фаза подщелачивается 25% NH3 (рН 10,0 по универсальному индикатору) и проводится трехкратная экстракция 3 мл эфира, центрифугировать.
Очистку вытяжки от сопутствующих веществ проводят методом экстакционной очистки: эфирное извлечение упаривают, сух ост-к растворяют в 20 мл 0,1 М HCl, переносят в елительную воронку и взбалтывают с эфиром; эфирный слой отбрасывают. После этого к водной фазе прибавляют р-р натрия гидроксида до рН=11-12 и экстрагируют хлороформом, хлороформные вытяжки объединяют
Наибольшее количество обнаруживается в моче и тканях печени.
Идентификация.
ТСХ. Извлечение 25-30 мл упаривается до минимального объёма, наносится на платинку. Рядом наносят стандартный р-р амитриптилина (10 мкг). Система метанол-аммиак 25% (100:1,5). После хроматографирования и высушивания обрабатывают р-вом Драгендорфа в модификации Мунье. Наблюдается жёлто-оранжевое пятно из вытяжки на уровне Rf стандарта амитриптилина [11].
Второй способ ТСХ на силикагеле в системе бензол-диоксан-32% аммиак-вода (62,5:35:0,5:2), детектирование УФ при 254 нм. В качестве стандартов наносятся растворы амтриптилина и его метаболита нортриптилина [7].Третий способ ТСХ анализа – на пластинках Силуфол, хроматографируя сначала в системе бензол-ацетон (80:20) до продвижения фронта до 10 см, затем после высушивания в системе бензол-диоксан-аммиак (60:35:5) до продвижения ещё на 10 см