Алгоритм проведения исследования

В практической работе лаборатория руководствуется нормативно-правовыми актами, актуальными для практического здравоохранения, а также локальными внутренними документами, методическими рекомендациями и указаниями, утвержденными руководством больницы.
Материалом для исследования острых кишечных инфекций являлись кал, моча. За время прохождения практики в лабораторию поступило 380 проб биоматериала. Материал принимают на регистратуре, в стерильных пробирках и банках. Лаборант присваивает анализу соответствующий номер, далее передает полученный материал в бактериологическую лабораторию.
Алгоритм составлен так, что исследуемый материал поступает на комплексное исследование, предполагающее одновременное микроскопическое изучение, фракционирование и обогащение и классическое бактериологическое исследование. Микробиологические исследования выполняли в соответствии с рекомендациями "Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений" приказ Минздрава от 22.04.85 г. N 535 [5, c.85].
С целью выделения энтеробактерий из клинического материала после поступления материала в лабораторию и его регистрации производили навеску на лабораторных весах от 0,2 г до 1 г. К навеске добавляли стерильный нейтральный физиологический раствор (ФР) или тиогликолевый буфер из расчета 1:10 (вес/объем). Материал тщательно гомогенизировали бактериологической петлей. Отбирали навеску фекалий и после взвешивания гомогенизировали ее в таком объеме физиологического раствора (0,85%-й раствор хлорида натрия, рН-7,0), чтобы получить исходное разведение материала в 10 раз (1 г навески-9 мл ФР; 0,8 г навески - 9,2 мл ФР). Содержимое контейнера тщательно перемешивали и оставляли при комнатной температуре на 10-15 минут. Таким образом, готовили первое десятикратное разведение. Затем готовили дальнейшие десятикратные разведения. В расставленные в штативе бактериологические пробирки (№№ 2-9) вносили по 4,5 мл стерильного нейтрального физиологического раствора. Из первого разведения стерильной пипеткой объемом 1 мл с неповрежденным концом переносили 0,5 мл материала в пробирку № 2. При этом конец пипетки прислоняли к внутренней стенке пробирки, не касаясь содержащейся в ней жидкости. После этого пипетку сбрасывали, брали другую такую же пипетку и перемешивали жидкость в пробирке № 2 путем пипетирования не менее 5 раз. После перемешивания этой же пипеткой переносили 0,5 мл в следующую пробирку, соблюдая те же правила, пока не закончили подготовку всех разведений.
Из приготовленных разведений делали дозированные посевы на питательные среды для культивирования микроорганизмов согласно ниже приведенной схеме.
Схема высевов на питательные среды
Питательная
среда Микроорганизмы, выделяемые на данной среде Разведения
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Агар Эндо энтеробактерии +   +   +   +       
Для получения роста изолированных колоний, доступных для подсчета на агаризованных средах, материал после высева на плотную среду тщательно растирали по всей поверхности агара стерильными шпателями

.
Первый день. Для выделения патогенных энтеробактерий из разведений 10-1, 10-3, 10-5, 10-7 делали высев на плотные питательные среды (по 0,05 мл) – в чашки со средой Левина и Эндо, в столбик со средой Олькеницкого для выявления лактозонегативных кишечных палочек). Одновременно делали массивный (0,5-1,0 мл) высев в жидкие среды обогащения (селенитовый бульон). Из разведений 10-3 и 10-5 – материал, в объеме 0,05 мл засевался на чашки с 0,5% кровяным агаром. Посевы помещали в термостат на 370С. Культивировали в течение суток.
Второй день. Бактерии семейства Enterobacteriaceae на среде Эндо через 24 часа образовывали колонии нескольких видов: 1) темно-красного цвета с металлическим блеском либо без него; 2) розового цвета; 3) бесцветные колонии с розовым и красным центром; 4) бесцветные прозрачные колонии. Последний тип характерен для паракишечной палочки.
Бактерии Escherichia coli на среде Эндо формировали выпуклые, окрашенные в красный цвет колонии с металлическим блеском (кишечная палочка) или без него. На среде Олькеницкого при росте лактозонегативных кишечных палочек цвет поверхности среды оставался без изменений. Кроме того, на среде Олькеницкого у E. coli отмечали отсутствие образования сероводорода. Гемолитические кишечные палочки при росте на кровяном агаре образовывали зоны гемолиза (зона разрушения эритроцитов). На среде Левина колонии кишечной палочки были черно-синими с металлическим блеском. По Граму клетки Escherichia coli окрашивались негативно, при микроскопии имели вид прямых палочек. Для окончательной идентификации Escherichia coli осуществляли высев колоний на цитратный агар Симмонса. Посевы культивировали в течение суток при 370С.
С выделенными культурами ставили реакцию агглютинации на стекле. С материалом каждой колонии отдельно ставят реакцию на стекле с поливалентной ОК-сывороткой. При положительном результате исследуемая культура образовывала хорошо видимые крупные хлопья. Положительный ответ давали в том случае, если выделенная культура по антигенному строению соответствовала той или иной серологической группе эшерихий. В тех случаях, когда колонии не агглютинировались смесью сывороток, выдавали отрицательный результат.
Для окончательной идентификации культур по О- и К- антигену ставили развернутую реакцию агглютинации в пробирках с ОК-сывороткой.
Штаммы рода Klebsiella имели такие же свойства, как и кишечная палочка, но при постановке теста на подвижность – оказались неподвижными. В возникновении дисбактериозов из клебсиелл основная роль принадлежит двум видам K. oxytoca и К. pneumoniae. Для видовой идентификации ставили тест на образование индола. Штаммы K. oxytoca были способны к образованию индола, а К