Приготовление гистологических препаратов

Объект исследования
Исследования велись на 8 самцах крыс линии Wistar, 5-месячного возраста 190 – 210 г. Крысы в эксперименте находились в стандартных условиях, пили и ели без ограничений.
Крыс делили на две группы по 4 шт. - крысы, которым 28 дней ежедневно три раза в день по 20 минут прибавлялась статическая нагрузка; крысы группы контроля, интактные самцы.
Животных экспериментальной группы на 29-й декапитацилизировали по основным требованиям эвтаназии. Всех животных держали в одинаковых условиях на типовом рационе питания, доступ к воде и пище был свободный, нормативы питания выбирали согласно Европейской конвенции по защите экспериментальных позвоночных животных (Страсбург, 1986), и согласно принципов Хельсинской декларации о гуманном отношении к животным.
2.2. Методика предъявления статической нагрузки
Статическая нагрузка экспериментальным животным была установлена способом вынужденного их пребывания в вертикальном положении на деревянной палке, находящейся далеко от к металлического устройства по которому шло напряжение 20 вольт. (рис. 2.1)
Рис. 2.1. Установка для создания статической нагрузки
(Katsuta, 1974, в модификации Н.П. Резвякова с соавт., 1980)
Конструкция была отделена от окружающей среды стеклянными и деревянными стенками высотой 1 м (S. Katsuta, 1974, в модификации Н. П.Резвякова и с соавт, 1980). Перед экспериментом каждую крысу учили забираться на шест и быть на нем 7 дней.
Эксперимент проходил 28 дней, крысы пребывали на вертикальном шесте 1 час (по 20 мин. в 3 подхода). Последний день крыс убивали используя декапитацию, препарировали, в каждой паре конечностей удаляли по 3 мышцы: m. plantaris, m. soleus и m. extensordigitorumlongus (EDL), взвешивали, крепили в 10%-й растворе формалина.
2.3. Приготовление гистологических препаратов
Исследуемые мышцы фиксировались так же в парафине по способу Меркулова Г

. А. [1969, С. 44 – 48].
В колбу 50-100 мл наливали 96% спирт, ложили обезвоженные мышцы, держали 6-12 часов.
Препарированные мышцы опускали в чистый хлороформ на 6-12 часов.
Из хлороформа мышцы переносили в смесь хлороформа с парафином при t = 35-40°С на 2-3 часа.
Мышцы вносили в расплавленный парафин при t = 54-65°С.
Парафинизация шла в 2 периода в разных ёмкостях: 1. 1 – 2,5 часа, 2. 0,5-1,5 ч. Парафинизация в целом продолжается 1 - 4 ч.
На дно другой ёмкости помещали глицерин грели до t = 60-70°C.
Мышцы после парафина опускали в емкость горячим пинцетом с глицерином и доливали горячий парафин. Действия производить быстро, аккуратно, чтобы между мышцами сохранячлось пространство.
Предыдущую емкость быстро охлаждали до появления пленки на парафине.
Затем один край емкости опускали в воду и смотрели может ли пленка выдержать тяжесть воды.
Далее емкость вносили в еще большую емкость и мыли под холодной проточной водой около 5-10 минут.
После твердения парафина его вынимают и подрезают края. Парафин должен обладать однородной структурой. Если парафин разнохарактерен, то нужно снова залить фрагменты мышц парафином.
С помощью скальпеля из парафина вырезают куски, с каждой стороны сохранив около 2 мм парафина.
Продольные и поперечные срезы делаются микротомом Санный МС – 2.
Парафин должен быть качественный, t его плавления должна составлять 48-52°C, он должен быть податлив.
Нож используют острый.
Употребляют парафиновый блок всегда прямоугольной формы.
Его длинник нужно поставить параллельно длиннику микротома. Так же узкую сторону наставляют к лезвию ножа параллельно.
Приблизительная толщина срезов должна колебаться 7—8 μ